የ ultrafiltration centrifuge tube አጠቃቀም እና ጥንቃቄዎች
1) ተስማሚ የ ultrafiltration ቱቦ ይምረጡ.የ UF ሽፋኖች ለተለያዩ ኬሚካሎች ባላቸው የመቻቻል ደረጃ ይለያያሉ።በተለምዶ የ ultrafiltration ቱቦዎች በ 10 ኪዳ ሞለኪውላዊ ክብደት መቁረጥ በሞለኪውላዊ ክብደት መቁረጥ ሊመረጡ ይችላሉ ይህም ከፍላጎት ፕሮቲን ሞለኪውላዊ ክብደት ከ 1/3 በላይ መሆን የለበትም, ለምሳሌ 35 kDa.የፍላጎት ፕሮቲን ሞለኪውላዊ ክብደት ወደ 10 ኪ.ዲ. ከሆነ፣ የሞለኪውል ክብደት 3 ኪ.ዲ የተቆረጠ የአልትራፋይልቴሽን ቱቦ መጠቀም ይቻላል።
(2) አዲስ የተገዛው አልትራፊልትሬሽን ደረቅ ነው፣ ከመጠቀምዎ በፊት ultrapure ውሃ ተጨምሮበት እና ውሃ ሙሉ በሙሉ በገለባው ፣ በበረዶ መታጠቢያው ወይም በማቀዝቀዣው ውስጥ ለጥቂት ደቂቃዎች ቀድመው አልፏል።ከዚያም ውሃው ይፈስሳል, ማለትም የፕሮቲን ፈሳሽ, እና ምን ያህል እንደሚጨመር, በቧንቧው አናት ላይ ካለው ነጭ መስመር የማይበልጥ.ክዋኔው ቀላል ነው, እና የፕሮቲን መፍትሄን ከመጨመራቸው በፊት የ ultrafiltration ቱቦ በበረዶ ላይ ቀድመው ማቀዝቀዝ ያስፈልጋል.
3) ሁለቱም የጅምላ እና የስበት ማእከል ወደ ሚዛኑ መድረስ ነበረባቸው።የማዞሪያው ፍጥነት እና ፍጥነት በጣም ፈጣን አይደሉም፣ አለበለዚያ የ ultrafiltration ሽፋንን በቀጥታ ይጎዳል።ሴንትሪፉጋል አልትራፊልትሬሽን ተጀምሯል (ሴንትሪፉጋል ወደ 4 ዲግሪ ቀድሟል)።የተለያዩ centrifuges RPM ወደ g ከተቀየረ በኋላ፣ የተለየ ነበር።የሴንትሪፉጅ ማፋጠን በትንሹ ተስተካክሏል, በሽፋኑ ላይ ያለውን ጫና ይቀንሳል.ልብ ይበሉ፣ ሴንትሪፉጁ የመድረሻ ፍጥነት ላይ ከደረሰ በኋላ ሴንትሪፉጁን መልቀቅዎን እርግጠኛ ይሁኑ፣ ወይም ችግር ካጋጠመዎት፣ ለመጀመሪያ ጊዜ መቋቋም አይችሉም።የገለባው ወደ ስፒኑል ያለው አቅጣጫ በመመሪያው መሰረት ተስተካክሏል (የማዕዘን ሴንትሪፉጅ መያዣ ከገለባ እስከ ዘንግ ቀጥ ያለ ነው)።በተግባራዊ አጠቃቀም, የአጠቃላይ የማዞሪያ ፍጥነት በመመሪያው ውስጥ ካለው ያነሰ ነው, ስለዚህም የሴንትሪፉጅ ቱቦ ህይወት ሊራዘም ይችላል.
3) ሁለቱም የጅምላ እና የስበት ማእከል ወደ ሚዛኑ መድረስ ነበረባቸው።የማዞሪያው ፍጥነት እና ፍጥነት በጣም ፈጣን አይደሉም፣ አለበለዚያ የ ultrafiltration ሽፋንን በቀጥታ ይጎዳል።ሴንትሪፉጋል አልትራፊልትሬሽን ተጀምሯል (ሴንትሪፉጋል ወደ 4 ዲግሪ ቀድሟል)።የተለያዩ centrifuges RPM ወደ g ከተቀየረ በኋላ፣ የተለየ ነበር።የሴንትሪፉጅ ማፋጠን በትንሹ ተስተካክሏል, በሽፋኑ ላይ ያለውን ጫና ይቀንሳል.ልብ ይበሉ፣ ሴንትሪፉጁ የመድረሻ ፍጥነት ላይ ከደረሰ በኋላ ሴንትሪፉጁን መልቀቅዎን እርግጠኛ ይሁኑ፣ ወይም ችግር ካጋጠመዎት፣ ለመጀመሪያ ጊዜ መቋቋም አይችሉም።የገለባው ወደ ስፒኑል ያለው አቅጣጫ በመመሪያው መሰረት ተስተካክሏል (የማዕዘን ሴንትሪፉጅ መያዣ ከገለባ እስከ ዘንግ ቀጥ ያለ ነው)።በተግባራዊ አጠቃቀሙ, አጠቃላይ የማዞሪያው ፍጥነት በመመሪያው ውስጥ ካለው ያነሰ ነው, ስለዚህም የሴንትሪፉጅ ቱቦ ህይወት ሊራዘም ይችላል.
(4) በቀሪው 1ml ላይ ሲያተኩር፣ 50ul of buffer solution ውሰዱ፣ 10ul ፍሰቱን ጨምሩ እና ምንም አይነት ሰማያዊ ቀለም ካለ ይመልከቱ፣ ይህም የአልትራፋይልትሬሽን ቱቦ ፕሮቲን ይጎድለዋል እንደሆነ ለመገመት።ቱቦው የሚፈስ ከሆነ፣ የላይኛውን ንብርብር እንደገና አፍስሱ እና ወደ አዲስ ቱቦ ውስጥ በማፍሰስ ultrafiltration ለመጀመር።ቱቦዎች ያመለጡ መሆናቸውን በትክክል ለማወቅ፣ ከመፍሰሱ በፊት ለ 10 ደቂቃ በ 5mgml BSA፣ በፕሮቲን ሙጫ ወይም በብራድፎርድ ጥሬ አሴይ ላይ መሮጥ እና የቀረውን የተከማቸ ፕሮቲን መፍትሄ (በበረዶ ላይ የሚሰራ እና ፕሮቲኖችን ከማሞቅ የሚከለክለው) በመጨመር ይቀጥሉ። ሁሉም ማጎሪያው ተጨምሯል.ወደ ቱቦ መዘጋት የሚያመራው የፕሮቲኖች ዝናብ ከተፈጠረ በሴንትሪፉግዜሽን ወቅት ጥንቃቄ ያድርጉ።የዝናብ መጠን ከተፈጠረ, ልዩ የዝናብ መንስኤ ከመጠን በላይ የፕሮቲን ክምችት ወይም ተገቢ ያልሆነ መያዣ መሆኑን ይወስኑ;የመጀመሪያው ብዙ የአልትራፋይልቴሽን ቱቦዎችን በአንድ ጊዜ በማጣራት ፣ ትኩረቱን በመቀነስ እና የኋለኛው ደግሞ ምንም የፕሮቲን ዝናብ እስኪፈጠር ድረስ የተለያዩ መፍትሄዎችን በመለዋወጥ ሊፈታ ይችላል።
(4) በቀሪው 1ml ላይ ሲያተኩር፣ 50ul of buffer solution ውሰዱ፣ 10ul ፍሰትን ጨምሩ እና ምንም አይነት ሰማያዊ ቀለም ካለ ይመልከቱ፣ ይህም የአልትራፋይልትሬሽን ቱቦ ፕሮቲን ይጎድለዋል እንደሆነ ለመገመት።ቱቦው የሚፈስ ከሆነ፣ የላይኛውን ንብርብር እንደገና አፍስሱ እና ወደ አዲስ ቱቦ ውስጥ በማፍሰስ ultrafiltration ለመጀመር።ቱቦዎች ያመለጡ መሆናቸውን በትክክል ለማወቅ፣ ከመፍሰሱ በፊት ለ 10 ደቂቃ በ 5mgml BSA፣ በፕሮቲን ሙጫ ወይም በብራድፎርድ ጥሬ አሴይ ላይ መሮጥ እና የቀረውን የተከማቸ ፕሮቲን መፍትሄ (በበረዶ ላይ የሚሰራ እና ፕሮቲኖችን ከማሞቅ የሚከለክለው) በመጨመር ይቀጥሉ። ሁሉም ማጎሪያው ተጨምሯል.ወደ ቱቦ መዘጋት የሚያመራው የፕሮቲኖች ዝናብ ከተከሰተ በሴንትሪፉግዜሽን ወቅት ጥንቃቄ ያድርጉ።የዝናብ መጠን ከተፈጠረ, ልዩ የዝናብ መንስኤ ከመጠን በላይ የፕሮቲን ክምችት ወይም ተገቢ ያልሆነ መያዣ መሆኑን ይወስኑ;የመጀመሪያው ብዙ የአልትራፋይልተሬሽን ቱቦዎችን በአንድ ጊዜ በማጣራት ፣ ትኩረቱን በመቀነስ እና የኋለኛው ደግሞ ምንም የፕሮቲን ዝናብ እስኪፈጠር ድረስ የተለያዩ መፍትሄዎችን በመለዋወጥ ሊፈታ ይችላል።
(5) የመጀመሪያዎቹ ጥቂት እርምጃዎች ፕሮቲኑን ለማተኮር ይጠቅማሉ፣ እና ቋቱ እንዲቀየር ከተፈለገ፣ አዲስ ቋት (በ 0.22um ultrafiltration membrane) ወደ 1 ሚሊ ሜትር አጠቃላይ ፕሮቲን በቀስታ ይጨምሩ እና እንደገና ወደ 1 ሚሊ ሜትር አካባቢ ለሶስት ይጨምሩ። ተከታታይ ጊዜዎች, በመጨረሻው የተጠናከረ የመጨረሻ መጠን በተፈለገው የፕሮቲን መጠን ላይ በመመስረት, በአጠቃላይ ከ 500ul ያልበለጠ, ግን በ 200ul ውስጥም ጭምር.በእያንዳንዱ ጊዜ ቢያንስ 10 × ወይም ከዚያ በላይ የድምጽ ማበልጸጊያ ሲሰላ 1000 × ወይም ከዚያ በላይ በሶስት አጋጣሚዎች፣ በመሠረቱ የማከማቻ ለውጥ ያክል።
(5) የመጀመሪያዎቹ ጥቂት እርምጃዎች ፕሮቲኑን ለማተኮር ይጠቅማሉ፣ እና ቋቱ እንዲቀየር ከተፈለገ፣ አዲስ ቋት (በ 0.22um ultrafiltration membrane) ወደ 1 ሚሊ ሜትር አጠቃላይ ፕሮቲን በቀስታ ይጨምሩ እና እንደገና ወደ 1 ሚሊ ሜትር አካባቢ ለሶስት ይጨምሩ። ተከታታይ ጊዜዎች, በመጨረሻው የተጠናከረ የመጨረሻ መጠን በተፈለገው የፕሮቲን መጠን ላይ በመመስረት, በአጠቃላይ ከ 500ul ያልበለጠ, ግን በ 200ul ውስጥም ጭምር.በእያንዳንዱ ጊዜ ቢያንስ 10 × ወይም ከዚያ በላይ የድምጽ ማበልጸጊያ ሲሰላ 1000 × ወይም ከዚያ በላይ በሶስት አጋጣሚዎች፣ በመሠረቱ የማከማቻ ለውጥ ያክል።
የልጥፍ ሰዓት፡- ህዳር-09-2022