በ PCR ሙከራዎች ውስጥ በብዛት ጥቅም ላይ የሚውሉ በርካታ ኢንዛይሞች

የፖሊሜሬዝ ሰንሰለት ምላሽ፣ አህጽሮተ ቃልPCRበእንግሊዘኛ የተወሰኑ የዲ ኤን ኤ ቁርጥራጮችን ለመጨመር የሚያገለግል ሞለኪውላር ባዮሎጂ ዘዴ ነው።ከሰውነት ውጭ እንደ ልዩ የዲ ኤን ኤ ማባዛት ተደርጎ ሊወሰድ ይችላል, ይህም በጣም ትንሽ የዲ ኤን ኤ መጠን ይጨምራል.በጠቅላላው ጊዜPCRየምላሽ ሂደት ፣ አንድ የቁስ አካል ወሳኝ ሚና ይጫወታል - ኢንዛይሞች።

1. ታክ ዲ ኤን ኤ

በመጀመሪያዎቹ ቀናት ሙከራዎች ውስጥPCR, ሳይንቲስቶች Escherichia coli DNA polymerase I ን ተጠቅመዋል, ነገር ግን በዚህ ኢንዛይም ላይ ችግር አለ-ዑደት በተፈጠረ ቁጥር አዲስ ኢንዛይም መሙላት ያስፈልገዋል, ይህም የቀዶ ጥገና እርምጃዎችን በትንሹ የተወሳሰበ እና ሙሉ በሙሉ በራስ-ሰር ለመጨመር አስቸጋሪ ነው.ይህ ችግር በ1988 ሳይንቲስቶች ታክ ዲኤንኤ ፖሊመሬሴስን ከቴርሙስ አኳቲከስ ካገለሉ በኋላ ተፈትቷል። ከዚያን ጊዜ ጀምሮ የዲ ኤን ኤ አውቶማቲክ ማጉላት እውን ሆኗል።የዚህ ኢንዛይም ግኝት እንዲሁ ያደርገዋልPCRቴክኖሎጂ ምቹ ፣ ተግባራዊ እና ሁለንተናዊ ቴክኖሎጂ።በአሁኑ ጊዜ Taq DNA polymerase በዲኤንኤ ኪት ውስጥ በጣም የተለመደ ፖሊመሬሴ ነው።

2. PfuDNA

ከላይ እንደተገለፀው Taq DNase ትልቅ ስህተት አለው ስለዚህ ሳይንቲስቶች በተዛመደ አለመመጣጠን ምክንያት ልዩ ያልሆነ ማጉላትን ለማስቀረት ታክ ዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴስን በተወሰነ ደረጃ አሻሽለውታል ይህም ትክክለኛ ያልሆነ የፈተና ውጤት አስከትሏል።ነገር ግን የታክ ዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዝ ማሻሻያ የዲ ኤን ኤ ፖሊሜሬዜሽን በክፍል ሙቀት ውስጥ ያለውን እንቅስቃሴ ሊገታ ይችላል።PfuDNA polymerase ከላይ የተጠቀሱትን የ Taq DNA polymerase ጉዳቶችን በደንብ ሊሸፍን ይችላል ፣ ስለሆነም የ PCR ምላሽ በመደበኛነት ሊከናወን ይችላል ፣ እና የታለመው የጂን ማጉላት ስኬት መጠን በጥሩ ሁኔታ ሊሻሻል ይችላል።

3. የተገላቢጦሽ ትራንስክሪፕትሴ

የተገላቢጦሽ ትራንስክሪፕትሴስ በ1970 ተገኘ። ይህ ኢንዛይም አር ኤን ኤ እንደ አብነት ይጠቀማል፣ ዲኤንቲፒ እንደ substrate፣ የመሠረት ማጣመርን መርህ ይከተላል፣ እና በ5′-3′ አቅጣጫ ከአር ኤን ኤ አብነት ጋር የተመጣጠነ የዲኤንኤ ነጠላ ፈትል ያዋህዳል።የተገላቢጦሽ ትራንስክሪፕት በዋነኛነት በዲ ኤን ኤ ፖሊመሬሴ እንቅስቃሴ ከዲኤንኤ ወይም አር ኤን ኤ አብነቶች የተመረኮዘ ነው ስለዚህም ምንም 3′-5′ exonuclease እንቅስቃሴ የለውም።ሆኖም ግን፣ የ RNase H እንቅስቃሴ አለው፣ ይህም የተገላቢጦሽ ትራንስክሪፕትሴስን ውህደት በተወሰነ መጠን ይገድባል።የዱር ተቃራኒ ትራንስክሪፕትሴ ዝቅተኛ ታማኝነት እና የሙቀት-ተረጋጋነት ምክንያት ሳይንቲስቶችም አሻሽለውታል።

ለPCRሙከራዎች፣ ዋናዎቹ የፍጆታ ዕቃዎች፡- የግለሰብ PCR ቱቦ፣ ባለ 4/8-ስትሪፕ PCR ቱቦ፣ PCR ሰሌዳዎች።

ላቢዮPCR የፍጆታ ዕቃዎችየሚከተለው ይኑርዎትጥቅሞች:

PCR ሳህኖች: ሰፊ የሙቀት ዑደት ተኳሃኝነት;ከፍተኛ-ንፅፅር ፣ ቀላል በደንብ መለየት;በደንብ የፍሎረሰንት ነጸብራቅ; ጥሩሙቀት ማስተላለፍ;የተረጋገጠ ዲ ኤንኤሴ፣ አርናሴ፣ ዲኤንኤ፣ ፒሲአር አጋቾቹ እና የተፈተነ ከፒሮጅን-ነጻ።

የግለሰብ PCR ቱቦዎች: ትነት-ተከላካይ; ጥሩሙቀት ማስተላለፍ;እጅግ በጣም ጥሩ የእይታ ግልጽነት፤ የተረጋገጠ ዲናሴ፣ አር ኤን ኤ፣ ዲኤንኤ፣ ፒሲአር አጋቾቹ እና የተፈተነ ከፒሮጅን-ነጻ።

4/8-ጭረቶች PCR ቱቦዎች: እጅግ በጣም ቀጭን ግድግዳዎች; ከፍተኛ ግልጽነት; ጥሩ የፍሎረሰንት ነጸብራቅ;በፋርማሲዩቲካል ኢንዱስትሪ፣ በምግብ ኢንዱስትሪ እና በሞለኪውላር ባዮሎጂ፣ ከፍተኛ ጥራት ያለው፣ ድንግል ፒፒ ቁሳቁስ፣ የተረጋገጠ DNase፣ RNase፣ DNA፣ PCR አጋቾቹ እና የተፈተነ ፒሮጅን-ነጻ።